日本女子体育大学附属二階堂高等学校の制服は、伝統的な女子校の気品を保ちながら、現代的なスマートさを取り入れたブレザースタイルが基本です。派手すぎず地味すぎない絶妙なバランスで仕立てられており、フォーマルな場にも自然に馴染むデザインとなっています。
冬服スタイルは、深みのある濃紺のテーラードブレザーに、落ち着いたトーンのチェック柄スカートを合わせます。胸元を飾る上品なリボンが全体のアクセントとなり、顔周りを明るく引き立ててくれます。肌寒い季節には指定のVネックセーターやニットベストを重ね着することで、防寒性を確保しながらすっきりとしたシルエットを維持できる仕様です。
一方の夏服スタイルは、爽やかさと清潔感を重視した設計です。吸汗速乾性に優れたブラウスに、通気性の良い夏用チェックスカートを組み合わせます。長袖ブラウスの腕まくりや半袖シャツの活用、冷房対策のサマーベストなど、気温や体調に合わせて柔軟に体温調節ができる実用性の高さが生徒からも支持されています。